医学真菌基因组学研究进展(上)

近年来,一系列重要医学致病真菌全基因组数据陆续被公布,使人类对这些致病菌的认识提高到全新水平.本文在回溯医学真菌基因组学和基因组测序技术发展历程、综述其发展现状及应用的基础上,再分别介绍重要医学真菌全基因组测序的进展.     

白念珠菌SPE1基因高表达菌株构建及鉴定

目的构建白念珠菌SPEl基因高表达菌株。方法将白念珠菌．SPEl基因的ORF置于高表达质粒载体pCaE—xP的MErF3启动子后面,构建pCaEXP—SPEJ的高表达质粒,然后采用醋酸锂转染法将高表达质粒转染白念珠菌RMl000中,在SD—ura’met—cys-选择性固体培养基上筛选阳性克隆,抽取基因组进行PCR验证,将验证为阳性转染子的菌落采用RealTimeRT．PCR方法进行SPE1基因转录水平的表达验证。结果通过酶切鉴定pCaEXP—SPEl高表达质粒构建正确;通过PCR验证表明SPEl基因整合到亲本菌中的RPl0位点;通过RealTimeRT—PCR方法筛选出sPEJ基因在转录水平高表达的菌株。结论利用高表达质粒载体pCaEXP通过基因同源重组等方法正确构建SPEl基因高表达的白念珠菌。     

胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物膜形成的影响

目的研究胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜形成的影响。方法采用甲基四氮盐（XTT）还原法评价胡桃楸提取物对白念珠菌的生物膜形成及黏附性的影响。镜下观察胡桃楸提取物对白念珠菌生物膜的形态学影响。结果胡桃楸提取物抑制白念珠菌生物膜50％及90％的最小抑制药物浓度（SMIC50、SMIC90）分别为15．2μg、23．4μg。胡桃楸提取物作用浓度大于20μg时对该菌细胞黏附有抑制作用。30μg胡桃楸提取物可完全抑制白念珠菌生物膜的形成。结论胡桃楸提取物对体外白念珠菌生物的膜形成有较强的抑制作用。     

Novel point mutations in the ERG11 gene in clinical isolates of azole resistant Candida species

The azoles are the class of medications most commonly used to fight infections caused by Candida sp. Typically, resistance can be attributed to mutations in ERG11 gene (CYP51) which encodes the cytochrome P450 14α-demethylase, the primary target for the activity of azoles. The objective of this study was to identify mutations in the coding region of theERG11 gene in clinical isolates of Candidaspecies known to be resistant to azoles. We identified three new synonymous mutations in the ERG11 gene in the isolates of Candida glabrata (C108G, C423T and A1581G) and two new nonsynonymous mutations in the isolates of Candida krusei - A497C (Y166S) and G1570A (G524R). The functional consequence of these nonsynonymous mutations was predicted using evolutionary conservation scores. The G524R mutation did not have effect on 14α-demethylase functionality, while the Y166S mutation was found to affect the enzyme. This observation suggests a possible link between the mutation and dose-dependent sensitivity to voriconazole in the clinical isolate of C. krusei. Although the presence of the Y166S in phenotype of reduced azole sensitivity observed in isolate C. kruseidemands investigation, it might contribute to the search of new therapeutic agents against resistant Candida isolates.     

三种药物联合治疗假丝酵母菌性阴道炎的临床疗效评价

目的:研究克霉唑阴道片、硝夫太尔制霉素阴道软胶囊联合定君生栓治疗复发性假丝酵母菌性阴道炎的临床疗效,为临床治疗提供依据。方法:选取2014年9月到2015年6月我院就诊的复发性假丝酵母菌性阴道炎患者60例,按照随机数字表法将患者分为实验组和对照组,每组30例,实验组给予克霉唑阴道片、硝夫太尔制霉素阴道软胶囊联合定君生栓治疗,对照组给予克霉唑阴道片和定君生栓治疗,治疗前检测所有患者病原菌分布情况,治疗后随访3个月,分析两组临床疗效和不良反应。结果:细菌培养结果共分离出158株假丝酵母菌,其中白色假丝酵母菌最多,占66.46%;实验组总有效率为93.33%,显著高于对照组的76.67%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05);两组不良反应发生率比较无统计学意义(P0.05)。结论:克霉唑阴道片、硝夫太尔制霉素阴道软胶囊联合定君生栓治疗复发性假丝酵母菌性阴道炎具有较好的临床疗效,且无明显不良反应。     

双链季铵盐复合邻苯二甲醛消毒液研制及比较

通过将邻苯二甲醛、双链季铵盐与相应助剂进行复配,制备一种新型的复合消毒剂,并进行灭菌消毒试验、清洗效果及稳定性试验。实验证明邻苯二甲醛复合消毒剂浓度在2000 mg/L时对白色念珠菌的杀灭效果达100%。该复合消毒剂原液经45℃恒温放置15 d,邻苯二甲醛的下降率为2.26%左右,稳定性和杀菌能力有明显提高。对油脂清洗率达98%以上,具有消毒清洗双功能。因此邻苯二甲醛复合消毒剂对消化内镜消毒灭菌效果高,耗时短,用法简便,并可降低对医务人员健康的危害性,是值得在医院临床推广使用的高效消毒剂。     

氯己定联合联苯苄唑对念珠菌的协同抗菌活性

本文用两种方法评价了联苯苄唑与氯己定联用对临床分离念珠菌的抑菌活性。微量液基稀释法显示,氯己定单独作用于念珠菌时,对念珠菌没有明显的抑制作用,最低抑菌浓度均大于16μg/mL;与联苯苄唑联合应用时,对17株念珠菌均表现为协同抑菌作用。纸片扩散法也观察到,含氯己定和联苯苄唑的纸片对4种念珠菌均能产生直径大于单药纸片的抑菌圈。结果显示,联苯苄唑联合低浓度氯己定对多种念珠菌具有协同抑菌作用。     

基于定量蛋白质组学的NT-89抗白念珠菌作用机制研究

目的利用定量蛋白质组学iTRAQ技术,分析抗真菌化合物NT-89作用后白念珠菌蛋白质组的含量变化。方法提取NT-89作用前后的白念珠菌总蛋白与细胞壁蛋白,利用iTRAQ技术检测蛋白提取物中蛋白质的相对丰度,寻找药物作用前后的差异蛋白,并利用GO数据库注释蛋白质功能分类。结果总蛋白(TP)提取物中检测出295种差异蛋白,其中的Ywp1p、Pga10p在总蛋白中含量下调最为显著。细胞壁蛋白(CWP)提取物中有6种GPI锚定蛋白含量显著降低。结论 NT-89影响了白念珠菌细胞壁的结构完整与功能,iTRAQ技术能够为药物的作用机制研究提供有效参考信息。